CPC最佳植物保护实践

支持物种在野外生存

组织培养和低温保存的关键信息
  • 组织文化和 低温贮藏 对于产生很少种子的特殊物种或不耐干燥或冷冻的种子,是否有替代的贮藏方法.
  • 充分储存特殊物种需要专门的专业知识, 基础设施, 比传统的种子储存资源更丰富.
  • 因为对许多稀有植物来说,物种特异性的协议是未知的, 植物保护的这一领域是一个开拓性的研究领域. 网上信誉赌博下注的实践者有机会为这个领域做出重大贡献.

为什么低温保存对濒危本土植物很重要?

低温贮藏, 在液氮中储存组织的方法, 珍稀植物保护变得越来越重要了吗. 这是因为许多植物种类,包括大型的... 阅读更多

特殊的植物是那些不能用传统的种子库方法长期保存的植物. 这包括有很少或没有种子可供储存的物种, 有不耐的种子的物种 干燥 和冻结, 或者耐旱的种子, 但不冻结, 或只能在-20°C下保存不到10年的物种. 为 非原位 保护这样的物种需要一些方法来替代 传统的存储,如 低温贮藏 和 在体外 方法. 世界上许多植物物种可能符合这些储存类别(见Seaton等人. 2018). 一个特殊物种的保护收集的主要目的是支持物种的生存和减少其灭绝的风险, 因此准确的记录 出处、分化的母系和多样化的遗传表现是先决条件.

超低温贮藏或组织培养是另一种贮藏方法 传统的存储, 但这些替代方案只有在从业者能够将培养的组织或低温保存的植物部分恢复到能够移植到野外的有根植物的情况下才能成为真正的保护方案. 种子研究也是如此, 对农业或商业上重要物种的研究远远多于对稀有野生物种的研究. 随着越来越多的共产党员进行组织培养和 低温贮藏 研究, 人们对稀有物种的特殊需求了解得越多,就越有可能对其模式进行研究. 在科学发展的这个阶段, 我们根据粮农组织的指导方针和最近的研究提出建议,指出这些研究机构之间的巨大差异源于我们的物种是罕见的这一事实, 我们通常只有很少的繁殖体来启动研究, 我们很高兴能有幸存者!

空间和人员编制总是会影响一个机构的保护计划. 特殊物种需要更多的工作人员投入时间, 员工的专业知识, 还有比传统种子银行更大的基础设施. 有鉴于此,我们鼓励从业者向有经验的人伸出援手 在体外 (组织培养) 低温贮藏 如果他们计划创建内部项目,或者希望在特殊物种的研究项目上进行合作,他们就会成为CPC网络中的专家.

香蕉、牛油果和香草有什么共同之处?

乔伊斯Maschinski, 乔伊斯Maschinski采访了世界著名的植物低温保存生物学家,了解低温保存对未来食物的重要性.... 阅读更多
为了确定长期保存植物组织的最有效方法,需要问的问题

保护野生特殊物种的案例研究:Crotalaria avonensis

乔伊斯·马斯基(乔伊斯Maschinski),网上信誉赌博下注,瓦莱丽·彭斯(瓦莱丽便士),辛辛那提动物园 & 植物园Crotalaria avonensis是佛罗里达州特有的一种濒危豆科植物... 阅读更多

确定存储需求

一些作者研究了种子存储行为中的模式(请参阅参考资料),这些模式可以帮助收集者. 从文献综述开始,检查之前是否对您的分类单元做过任何研究. 你可以检查同源物,但要注意,这并不总是可靠或决定性的. 我们在夏威夷的同事发现,在一个属内,储存行为有很大的不同(Walters, Weisenberger和克拉克, 个人通信). 许多因素决定了种子对干旱或冰冻的耐受性的变化. 以下是在种子中观察到的一些一般模式,这些模式倾向于经受传统贮藏或不.

特征 可能成为正统派
(耐旱性和耐寒性)
对传统存储的容忍度值得怀疑
栖息地 Arid is especially likely; If it is not growing in a wetl和, it is likely 湿地,河岸
在自然条件 种子通常经历干燥和/或硬冻结 种子通常保持湿润,不会经历硬冻
制种季节 不是春天 春天
生命形式 没有树
种子银行 持续的 不持久
休眠 与休眠 不休眠
种子成熟时的水分含量 当它自然地从植物脱落时是干燥的 高(30% - -70%)
种子大小 非常大(鳄梨种子不耐干燥)或非常小(兰花种子和蕨类植物孢子需要储存在液氮中)
干燥敏感种子比例高的植物类群 具有主要正统种子的植物群
ANITAGrade, 棕榈目, 杜鹃花目, 壳斗目, Icacinales, Laurales, Magnoliales, Malpighiales, 桃金娘目, 兰科, Oxalidales, 檀香目, 杨柳科, Sapindale 茄科、禾本科、菊科、十字花科

对体外共生萌发的芭蕉属植物进行保护

阿什利·克莱顿和彼得·扎勒, 黑兹尔顿瓦尔蒙特沼泽的朗伍德花园, PA, 种群有三种, Platanthera的国家分类群:P. ciliaris,... 阅读更多

收集特殊物种

收集前做好准备工作.

收集和研究兰花种子

大卫Remucal, 虽然许多种子银行避免使用兰花, 越来越多的组织开始接受他们, 或者为那些... 阅读更多

采集时,不得危害采集地点和珍稀种群.

争取在植物成熟的适当阶段采集植物材料.

  • 在你加入时注意种子的成熟期. 一般情况下,最好收集成熟的孢子和种子. 然而, 未成熟的种子可以保存在液氮中或提取胚进行离体培养.
  • 收集适合你的方法的组织. (见 图2.1.)
  • 收集嫩枝或新生长的组织. 一般, 太老的组织不适合通过扦插或组织培养进行传统繁殖.
  • 如果组织不能快速运输到实验室,考虑进行体外现场采集. (见彭斯等人. 2002.这需要用用70%乙醇消毒的工具收集组织.
  • 茎组织, 记录芽的成熟或发育状态(软/硬), 叶扩张阶段, 程度的扩张, color, 等.)
  • 拍下种子荚或芽的照片来记录成熟的过程.

在适当的时候,收集相关的土壤共生生物.

  • 对于陆生兰花来说,在植物附近收集土壤,捕捉菌根(Batty等人. 2002).
  • 菌根对某些物种的萌发和培养可能是重要的.

运输到种子库或组织培养设施在尽可能短的时间和在最好的条件下.

  • 处理得越快,生存的机会就越大. 在航运之前的种子, 与种子库或繁殖设施的接收方科学家交谈,以确保有人将在场接受和处理加入迅速.
  • 船运种子或组织过夜种子银行或繁殖设施. 在运送标本到银行或培养机构时,要特别小心. 用几乎不湿(不湿)的纸巾包裹茎的插条,并将每条母线装入贴有标签的Ziploc™袋中. 使用聚苯乙烯泡沫容器,以减少运输过程中的温度波动. 不要用冰或干冰装运. 如果隔夜运输是不可能的,考虑在体外现场收集.

图2.1 -分生组织架构. 虽然分生组织结构因物种而异, 对目标稀有物种的了解将会告诉我们哪些繁殖方法是可行的.

图2.2 -繁殖体类型的多样性和离体培养的选择. 离体培养可以由从种子中提取的孢子、种子或胚胎开始. 从顶端或节点的分生组织中提取的生长尖端或从叶或根中提取的细胞可作为离体培养的来源.

捕获代表性遗传多样性.

  • 在缺乏遗传数据的情况下, 通过从具有不同外观的个体中收集种子或组织来捕捉物种多样性的广度, 从多个种群中收集, 把所有的血统都按母系分开.
    • 考虑你正在收集/保存的繁殖体所代表的遗传多样性. 营养物质(根或芽)代表与亲本相同的基因型. 种子或孢子是可能来自多个亲本受精的产物, 因此,它们可能比营养物质具有更大的遗传多样性. (见 图2.2.)
    • 对于一些特殊的物种(蕨类和兰花), 从一个母体计划中很容易获得数百个基因相关的种子或孢子t. 注意从许多个人身上收集种子或孢子,以增加您加入时所代表的潜在多样性. (见CPC最佳实践部分 “从野生稀有植物种群中收集种子.”)
  • 如果可能的话,在收集种子的同时,收集平行的叶片样本用于DNA库.

计划你的采样策略.

  • 利用种群大小和繁殖力来计划你的采样策略.
  • 最终收集的目标数量可能取决于一个机构处理和维护储存和活的植物的能力. 当你收集时,要考虑劳动力、空间和设施容量(彭斯2011).
  • 试图从每个种群中捕获尽可能多的不相关个体. 努力收集50株母株(见CPC最佳实践一章) 获取、维护和使用保护标本的遗传指南 并分别维持母系线. 常见问题-为什么从50株母系植物中收集?
    • 如果从少于100个个体的种群中收集种子, 尝试从所有生殖个体中捕获种子,无论你是低温储存种子或胚胎. 对于较大的种群,50株母株的亚样本就足够了.
    • 如采集枝条进行组织培养, 在植株的结构上收集的碱基数和存在于节点上的腋芽数. 对于有多个分枝的物种,从每株母株上收集一至五根枝条. 只有一个分生组织的物种, 在去除顶端分生组织之前,请确保植株结构支持腋芽. 如果芽是从植物基部或在土壤水平上取的, 它们可能需要用表面消毒剂和抗菌剂进行严格的去污处理.
    • 遗传研究可以帮助确定野生基因在迁地保护收集中的表现(Griffith等. 2015).

设法捕捉一个物种的至少五个种群.

如果它们存在,设法跨越时空捕获一个物种的至少五个种群. 看到 “从野生稀有植物种群中收集种子.”

对集合进行适当的文档记录.

  • 重要的加入信息包括:机构名称, 加入数量, 收集器, 收集日期, 物种的名字, 家庭, 位置信息, 地理参考纬度和经度, 网站的所有权, 许可证文件, 以及种群信息(种群中的个体总数), 生殖个体数, 以及采集种子的样本数量). (见 加州植物园的野外采集样本.)
    • 提供生境信息可为该物种的萌发或组织培养需求提供线索. 推荐的字段包括光照和水分条件, 土壤类型, 坡方向, 和相关的物种. 提供生境及生境内植物的照片.
    • 一定要记录任何相关的集合(例如, 落叶, 土壤, 菌根真菌),并通过处理样品来维持这种网上信誉赌博下注.
    • 根据您的机构协议收集并报告额外的接入数据. 遵守 植物园植物记录国际转移格式 和/或 达尔文的核心标准 是否能够方便地向合作伙伴传递信息.
  • 每次登录填写一个字段表单. 只需要为来自区分至少1公里的人群的集合创建多个登录号和字段表单.
  • 通过向参与机构提供在线表格,向CPC和NLGRP传送入会数据 网上信誉赌博下注成员资源. 一旦进入这个资源选项卡, 申请表格可在“NLGRP提交”选项卡中找到.

特殊物种实验室程序

在种子库或低温保存实验室, 按照每种材料类型的步骤来最大限度地提高其生存能力.

为这些程序中的任何一个保持母体线路. 为了获得最高的保存价值, 保持材料的形式,将允许恢复整个植物,可用于重新引入野外.

最大化种子存活率的步骤(怀疑种子贮藏行为异常)

  • 通过发芽试验来测试新鲜种子的活力. 例如,进行10个重复10个种子的实验. 根据你有多少种子和你最终想储存多少种子来减少你测试的样本大小. 使用幼苗进行离体培养.
  • 确定种子是否适合常规贮藏. 请参阅“确定存储需求”框.
  • 如果它们符合正统的类别,请参阅《网上信誉赌博下注最佳实践》一章 “传统的种子银行,以支持物种在野外生存.”
  • 如果种子被怀疑是特殊的,你有足够的种子, 测试五种或更多的种子,以确定种子是否能经受干燥. 使用CPC最佳实践部分中描述的方法在盐溶液或二氧化硅上干燥种子, 清洗、加工、干燥和储存传统种子.”
  • 如果你有一个精确的刻度,测试5到10颗种子的含水量. 如果你没有种子尺寸所需的精度刻度,这个测试可以在NLGRP中进行. 称重量,放入烤箱烘干,直至没有重量变化,再称重量. 你可以计算水分含量. 如果你的种子在脱落时水分含量很高,那么它很可能是例外. (参见Kew信息表,测量种子水分状态.)
  • 一旦你确定种子是特殊的, 接下来所需的步骤将根据种子的大小而有所不同. 对于大的种子(橡树和更大的), 提取胚胎,并按照以下步骤进行体外和低温保存. 常见问题-如果我认为长期低温保存是必要的,我是否需要进行体外步骤?
  • 小种子, 如兰花, 种子直径小于5毫米, 和蕨类植物孢子, 使用风干方法干燥, 将种子放入一个小容器(DSC平底锅或微型离心管), 装入低温贮藏稻草,放入液氮中.

 在离体培养中最大化组织存活的步骤

  • 回顾以往对你的物种或属的任何体外研究,以指导你的程序细节.
  • 如果没有在你的物种或属上做过其他工作, 进行体外培养的基本方案. 记录每个阶段的步骤. 如果组织对基本方案没有反应,修改方案并再次测试. (见 图2.2 和 表2.1.)
  • 采取措施尽量减少污染.
  • 在通风罩下用表面消毒剂处理来料. 常见问题-微繁殖的第一阶段, 表面消毒, 我如何知道哪种消毒剂和浓度是有效的,而不会损坏我的材料?
  • 包括抗微生物剂(例如,杀菌剂,PPM等).)在媒介中,特别是对来自野外的材料.
  • 定期监测生长和污染情况. 根据需要刷新媒体.
  • 将栽培中的芽数乘上.
  • 从每条母线上保留足够的材料,防止母线随时间的推移而磨损.
  • 使植物慢慢远离阳光直射.
    • 删除从文化, 转移到适当的土壤混合物, 在塑料袋或玻璃下保持高湿度. 慢慢地增加通风. 如果植物组织枯萎,更换保护层并以较慢的速度进行硬化. 这个过程可能需要几个月.
    • Arid-adapted植物, 比如那些来自沙漠的, 从组织培养到环境条件往往有更多的困难比物种从潮湿或潮湿的生态系统. 在文化中, 可以考虑一些预适应强化, 比如给培养皿提供更好的通风, 更高的光, 或更低营养, 这是适合这个物种的. 用通风盖代替密封盖,使试管内的幼苗变硬. 从培养物中移出,转移到适当的土壤混合物中,并保持高湿度.

茎尖超低温保存技术在橡树迁地保护中的应用.

Dr. 瓦莱丽·彭斯,辛辛那提动物园 & 尽管有超过20种橡树的芽培养的公开协议, 橡木的低温贮藏... 阅读更多

表2.1微繁殖阶段

阶段 操作 评论
1. 建立和稳定 处理和预先选择目标工厂,以减少潜在的微生物污染. 选择外植体类型:芽尖,花芽,腋芽,叶,或胚胎. 在适当的培养基上刺激腋生或不定芽的形成. 预先处理外植体以防止褐变. 检查微生物菌落,以确定污染是否来自真菌或细菌生活在植物组织或没有有效消毒的琼脂表面.
2. 用芽 分多分枝外植体. 在新媒体上放置小芽与激素,以刺激更多的芽发展. 检查是否有污染.
3. 根的形式 将发育良好的嫩枝转移到含有生长素的培养基上诱导生根. 在这个阶段,幼苗不易受到偶然的微生物污染.
4. 适应新环境 使已生根的幼苗适应温室条件. 从根中取出琼脂. 使用牧草混合盆栽去除潜在的污染源.
昆明植物园的组织培养实验室有许多来自中国的珍稀物种. 图片来源: 乔伊斯Maschinski.

图2.3 – 体外和低温保存. 来自体外供体植株, 茎尖可以切除, 消毒, 放在无菌的营养培养基上. 应用细胞分裂素可促进多枝芽生长. 随着芽的增殖,可以进行低温保存方法的试验. 茎尖被放置在高蔗糖溶液中以进行渗透保护, 其次是浸, 孵化, 或暴露于低温保护剂溶液中(描述的是封装脱水), 暴露在液氮中, 然后存储. 对于未知的耐低温贮藏的物种,建议沿着该过程的实验步骤. 实验成分可能包括渗透保护溶液的摩尔浓度, 冷冻保护剂的类型和暴露时间, 液氮暴露的速率和持续时间, 以及长期储存的时间. 保存后,用体外方法加热和回收针尖.

 最大化冷冻保存组织存活的步骤

  • 在种子试验(以上)完成后, 放入适当的密闭容器中,用液氮储存.
  • 对于在体外生长的芽或种子胚,分离芽尖或胚. 这可能需要用解剖显微镜. 最好的低温保存通常发生在小的材料上. 例如,尺寸小于2毫米× 2毫米的尖头最适合使用. 对于在体外生长的芽或种子胚,分离出芽尖或胚(图2.2和2.3).
  • 在冷冻保存之前或之后对分离的种子胚进行表面灭菌.
  • 遵循低温贮藏协议 . 低温保存方案中的每一步, 测试一个对照组,以确定组织是否存活了这一步.
  • 在液氮暴露后争取40%的存活率. 如果存活率低于40%, 多做冷冻保存实验,提高存活率, 或者存更多的资料.
  • 努力保持每个母系的每瓶至少有10个芽尖的复制瓶.
  • 在40°C的水浴中加热回收材料.
  • 培养皿置于体外培养基上(媒体描述见Saad和Elshahed (2012)). 使用抗氧化剂来减少组织褐变. 抗氧化剂的种类可能因物种而异.
  • 采取措施避免污染.
  • 记录过程中的所有步骤.
  • 根一旦形成,就需要如上所述的适应.

保存收藏的特殊物种

在一个或多个活体收藏中保存的重复收藏(Fant等人. 2016).

把所有储存特殊物种的尝试都看作是实验性的.

  • 因为网上最靠谱正规的外围买球网站储存特殊物种的最佳方式,我们还有很多要学习, 所有试验都应该用最科学的方法记录下来.
  • 为了最大限度地提高我们的学习能力,以最好的方式保持特殊物种的存活, 不将特殊物种储存在

监测5年后加入的可行性, 10, 15, 如果有足够的材料,可以冷冻20年.

仔细记录实验方案.

  • 当将方案步骤与对照组进行比较时,报告对照组和治疗组的生存率. 记住,那些不成功的步骤将有助于未来的实践者.
  • 注意材料使用的年代.
  • 将你的拍摄技巧在体外培养中拍照.
  • 注意平均拍摄针尖大小并拍照.
  • 注意针尖的状况和不同治疗方法的外观差异(例如, 多毛的, 形状, 不管现在还是现在, 等.). 注意表型的存活.
  • 追踪用于预培养的培养基类型, 股票, 和 recovery culture; note any additives used (for example, 阿坝, 抗生素, 等.); cryoprotectant used; cold hardening treatment; cooling rate 和 vitrification method used; 和 any modifications in st和ard procedures.

为什么低温保存如此有趣?

植物保护主义者发现,许多植物无法使用传统的种子银行技术来储存. 为了解决这个问题,研究人员正在探索... 阅读更多

国际标准

CPC指引参考资料
粮农组织植物遗传多样性标准基因库(粮农组织2014)
种质资源获取标准
6.1.1 所有加入基因库的种质资源都应该是合法获得的, 备有相关技术文件.
6.1.2 所有材料都应附上至少粮农组织/生物多样性多作物护照描述中详细说明的相关数据.
6.1.3 只有处于良好状态和始终处于成熟状态的材料才应被收集, 而且样本量应该足够大,使基因库成为一个可行的提议.
6.1.4 材料应在尽可能短的时间和最好的条件下运输到基因库.
6.1.5 所有来料都应经过表面消毒剂处理,除去所有附着的微生物,并进行处理,使其生理状态不发生改变, 在指定的接待区域.
水含量的非正统行为和评估测试标准, 活力和生存能力
6.2.1 应通过评估种子对脱水的反应,立即确定种子的贮藏类别.
6.2.2 含水量应单独测定, 在传播组件的独立组件上, 在足够数量的植物中.
6.2.3 活力和活力应通过发芽试验和在足够数量的个体中进行评估.
6.2.4 在实验期间, 清洗后的种子样品应保存在不允许任何脱水或水合的条件下.
顽固性种子水化贮藏标准
6.3.1 应在饱和RH条件下进行水合贮藏, 种子应该保存在密封的容器中, 在他们能忍受的最低温度下.
6.3.2 所有种子在水合储存前应消毒,并应清除受感染的物质.
6.3.3 储存的种子必须定期检查和取样,以检查是否发生了真菌或细菌污染, 是否有任何水分含量和/或活力和活力的下降.
体外培养和慢生长贮藏标准
6.4.1 体外培养的最佳贮藏条件的确定必须根据品种来确定.
6.4.2 用于离体保存的材料应以整株或嫩枝的形式保存, 或者储存器官,这些器官是自然形成的.
6.4.3 一个定期监测系统,检查体外培养的质量在缓慢生长的存储, 和可能的污染, 应该在适当的位置.
低温贮藏的标准
6.5.1 选择用于低温保存的外植体应该是尽可能高质量的, 并允许在切除和低温保存后继续发展.
6.5.2 每一步在低温协议应单独测试和优化的活力和活力保留外植体.
6.5.3 应采取措施,以抵消活性氧(ROS)在切除和所有后续操作的破坏性影响.
6.5.4 取出后,外植体应使用标准无菌程序消毒.

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